Brilliant Blue G

Brilliant Blue G

產品描述

考馬斯亮藍（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結構上前者比后者多了2個甲基，命名上“G”為Green 的縮寫，因G250的藍色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫，因R250的藍色染料呈微紅色調；“250”表示考馬斯亮藍的純度。生化實驗中常將考馬斯亮藍用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過與蛋白質內的氨基和羧基基團間的靜電結合作用以及范德華力，考馬斯亮藍與蛋白質形成強但非共價鍵連接的復合物。蛋白-染料復合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負電荷陰離子（如磺酸基），從而產生在膜上或者膠上肉眼可見的藍色。

考馬斯亮藍R250（Coomassie brilliantblue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達0.1μg蛋白。但是染色背景比較深，需要褪色后才能進行蛋白條帶的觀察。考馬斯亮藍G250對蛋白膠染色的靈敏度相對較差，zui低檢測到0.5μg蛋白。但是因其在三氯酸中不溶而以膠體形式存在，選擇性的和蛋白質結合形成復合物，染色迅速，著色深的蛋白質條帶數秒內可以顯現(xiàn)出來，約45min后著色zui深。而且染色背景低，不需要脫色即可進行蛋白條帶的觀察。因此，非常適合對電泳凝膠蛋白的快速定性分析。

考馬斯亮藍G250較多的用于溶液體系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白結合檢測法（Bradfordprotein-binding assay），此方法利用的就是G250與蛋白質結合的特性，Bradford試劑（也就是酸化的G250溶液）為陽離子，主要為雙質子化，溶液為紅色，其zui大吸收波長（Amax）為470nm。當與蛋白穩(wěn)定結合后，G250以陽離子，非質子化的形式存在，溶液變?yōu)樗{色，zui大吸收波長遷移到595 nm。藍色陽離子形式染料的量與樣本中蛋白的量成正比，因此通過直接測定595nm的吸光度來反映蛋白量。此法的優(yōu)點在于G250與蛋白質結合所需的時間較短（約2min左右），且結合的G250-蛋白質復合物室溫下約1h內保持穩(wěn)定。反應靈敏度高，是一種非常常用的微量蛋白快速定量方法。

產品性質