BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 BL521A 現(xiàn)貨

BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 BL521A BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒 500 次 簡(jiǎn)介： BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒的原理是蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)在堿性環(huán)境下能與 Cu2+生產(chǎn) 絡(luò)合物，并將 Cu2+還原成 Cu+，而 BCA 試劑可以特異性地與 Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的 復(fù)合物，并在 562nm 處有zui大的光吸收值，該復(fù)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可以 根據(jù)吸收值的大小來(lái)測(cè)定蛋白的含量。 試劑盒組份： 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格 BL521A-1 BCA 試劑 A 100 ml BL521A-2 BCA 試劑 B 3 ml BL521A-3 牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)溶液（5 mg/ml） 2×1 ml BL521A-4 PBS 溶液 10 ml 使用說(shuō)明： BCA 工作液配制： BCA 工作液配制： 將試劑 A 和試劑 B 按照體積比 50:1 比例混合，配成 BCA 工作液。 如，取 50ml 試劑 A 與 1ml 試劑 B 混合，配成 51 ml BCA 工作液。兩者混合時(shí)會(huì)有 沉淀形成，*混勻后沉淀消失，溶液應(yīng)為澄清淡藍(lán)色溶液。。 注：BCA 工作液室溫可放置一周不失效。 微孔板測(cè)定程序：（工作范圍 20-2000 μg/ml） 1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液用 PBS 溶液稀釋至 100µl，使其終濃度為 1.0 mg/ml。 2、按照下表配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液： 編號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 1 mg/ml BSA 標(biāo)準(zhǔn)溶液 μl 5 mg/ml BSA 標(biāo)準(zhǔn)溶液 μl BSA 標(biāo)準(zhǔn)溶液 µl 0 0.5 2.5 5.0 10 15 20 6 8 PBS 溶液 μl 20 19.5 17.5 15 10 5 0 14 12 BSA 終濃度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000 總體積 µl 20 µl 3、將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到微孔板中，并用 PBS 補(bǔ)足到 20 µl

4、向微孔板中加入 200 μl BCA 工作液，混勻，37℃放置 30 分鐘； 注：也可以室溫放置 2 小時(shí)，或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨 著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫 度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。 5、測(cè)定 562 nm 處的吸光值，并記錄讀數(shù)；以不含 BSA 的樣品的光吸收值作為空白對(duì) 照。 6、以 A562 為縱坐標(biāo)，BSA 含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。如 果所得到的蛋白濃度不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，請(qǐng)稀釋樣品后重新測(cè)定。 試管測(cè)定程序：（工作范圍 20-1000 μg/ml） 1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取 150µl 5mg/ml BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液， 加入 600μl PBS 溶液稀釋至 750µl，使其終濃度為 1.0 mg/ml。 2、按照下表配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液： 3、將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到試管中，并用 PBS 補(bǔ)足到 100 µl； 4、向試管中加入 2ml BCA 工作液，混勻，37℃放置 30 分鐘； 5、6 步驟同上。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 1、靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到 25µg/ml（在 20-1000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線 性關(guān)系），zui小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.2μg，待測(cè)樣品體積為 1-20μl。 2、BCA 法測(cè)定蛋白濃度的zui大優(yōu)點(diǎn)是蛋白濃度的測(cè)定可以耐受高濃度的去垢劑，可以 兼容樣品中高達(dá) 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略 高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM，無(wú) EGTA，二硫蘇糖醇低于 1mM，β-巰基 乙醇低于 0.01%。 3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 保存條件： 試劑 A 和試劑 B 室溫貯存；牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液-20℃貯存；PBS 溶液 4℃貯存。本試 劑盒有效期 1 年。

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